Badanie roli białka COPPER MODIFIED RESISTANCE1/PATRONUS1 w regulacji punktu kontrolnego formowania wrzeciona mitotycznego u Arabidopsis thaliana, 2020/04/X/NZ3/01605, Miniatura-4 (dataset)

Abstract

W celu zbadania funkcjonalnego powiązania białka CMR1/PANS1 z wrzecionem kariokinetycznym w projekcie przeprowadzono dwa rodzaje eksperymentów: wizualizację wrzeciona kariokinetycznego u mutanta cmr1-2/pans1-1 oraz testy ko-immunoprecypitacji partnerów białkowych w oparciu o mutanty z nadekspresją AtCMR1/PANS1, w obydwu przypadkach w siewkach traktowanych czynnikami destabilizującymi cytoszkielet mikrotubularny. Obserwacje mikroskopowe prowadzono na utrwalonych merystemach korzeniowych, wrzeciona mitotyczne wizualizowano techniką immunofluorescencji pośredniej z wykorzystaniem swoistych przeciwciał, a chromosomy barwiono DAPI. Detekcję ko-precypitowanych z CMR1/PANS1 białek wykonano przy pomocy Western blottingu, a obecność współstrąconych białek sprawdzono za pomocą swoistych przeciwciał.

To elucidate the functional relationship between CMR1/PANS1 and the mitotic spindle, two types of experiments were performed in frame of the project: the visualization of the mitotic spindle in cmr1-2/pans1-1 mutant and the co-immunoprecipitation analyses using mutants overexpressing AtCMR1/PANS1, both performed in Arabidopsis seedlings treated with the microtubule-destabilizing agents. Confocal microscopy-based visualization of the spindle was performed in fixed meristems using immunofluorescence with specific antibodies and DAPI staining. Detection of the co-precipitated with CMR1/PANS1 proteins was performed using specific antibodies and revealed by Western blot.