Binding of copper to porcine apoceruloplasmin. partial reconstitution of the enzyme

Abstract

Z preparatów ceruloplazminy (Cp) świni otrzymano apoceruloplazminę wg metody Morella i Scheinberga, w której jako czynnika redukującego miedź w ceruloplazminie używano kwasu askorbinowego (apoCp A) lub cysteiny (apoCp B). Pozbawione miedzi preparaty ceruloplazminy (apoCp) inkubowano z jonami miedzi w obecności reduktorów: kwasu askorbinowego lub cysteiny.Preparaty apoCp A charakteryzowały się bardzo dobrymi parametrami biochemicznymi, podobnie jak apoCp B, ale w przeciwieństwie do tych ostatnich, gorzej przyłączały miedź i w bardzo małym stopniu były zdolne do przywracania aktywności i zabarwienia po inkubacji z jonami miedziowymi (~ 1% powrotu aktywności i ~ 4% - barwy, w obecności kwasu askorbinowego oraz ~ 8% powrotu aktywności i ~ 23% - barwy, w obecności cysteiny). Znacznie lepsze parametry dla odtworzonej Cp uzyskiwano po inkubacji apoCp B z jonami miedziowymi w obecności cysteiny (64.2% powrotu aktywności i 50.3% barwy), ale nie w obecności kwasu askorbinowego (5.3% powrotu aktywności i 11.6% barwy). Jak widać niezależnie od rodzaju apoCp, zawsze korzystniejsze rezultaty otrzymywano w obecności cysteiny. Cysteina stosowana jako reduktor, zarówno podczas otrzymywania preparatów apoCp, jak i podczas inkubacji apoCp z jonami miedziowymi w celu odtworzenia ceruloplazminy, okazała się znacznie lepszym odczynnikiem w porównaniu z kwasem askorbinowym.