Badanie liponylolizyny i kwasu liponowego w kontekście ich właściwości antyoksydacyjnych

Abstract

Przedmiotem badań mojej dysertacji było opracowanie nowych, nieopisanych dotychczas procedur oraz metod analitycznych do równoczesnego oznaczania (i) całkowitej zawartości LA i formy LA związanej z białkami słabymi wiązaniami wodorowymi (ProtS-LA) w osoczu, (ii) całkowitej zawartości LA i LLys w moczu oraz (iii) całkowitej zawartości LA i LLys w homogenatach tkanek zwierzęcych. Prowadzone prace nad opracowaniem zasad postępowania analityczego dotyczyły optymalizacji etapów przygotowania próbki, rozdzielania chromatograficznego i oznaczania. Następnie każda z wyżej wymienionych procedur analitycznych została poddana procesowi walidacji, którego celem było określenie zakresu jej przydatności oraz ocena jej wiarygodności. W badaniach wykorzystano technikę wysokosprawnej chromatografii cieczowej w połączeniu z detektorem z matrycą diodową (HPLC-DAD). Wszystkie zoptymalizowane i zwalidowane procedury analityczne z powodzeniem zostały zastosowane do terapeutycznego monitorowania ilości LLys i/lub LA w moczu i osoczu potencjalnie zdrowych osób, przyjmujących LA w postaci komercyjnie dostępnego farmaceutyku, jak również do monitorowania stężenia LLys i LA w próbkach mięsa różnego pochodzenia. Wyniki badań niniejszej pracy wykazały, że opracowane metody pozwalają na równoczesne oznaczanie LLys i/lub LA na niskich poziomach stężeń, co może być niezwykle przydatne zarówno w badaniach farmakokinetycznych, jak i biochemicznych czy biomedycznych. Ponadto, w pracy zbadano właściwości antyoksydacyjne LLys z wykorzystaniem wodno-alkoholowych roztworów standardów LA, LLys, kwasu dihydroliponowego (DHLA) i dihydroliponylolizyny (DHLLys) oraz modelowego rodnika 2,2-difenylo-1-pikrylohydrazylu (DPPH). Stwierdzono, że LA i LLys nie charakteryzują się zdolnością wygaszania rodnika DPPH, podczas gdy zedukowana forma LLys czyli DHLLys wykazuje aktywność przeciwrodnikową. Przedmiotem realizowanej rozprawy doktorskiej były także dwie prace przeglądowe, poświęcone zagadnieniom homogenizacji próbek biologicznych i derywatyzacji chemicznej.